安徽道地药材断血流的愈伤组织诱导条件研究

　　摘要 [目的]研究不同基础培养基及添加的植物生长调节剂浓度对断血流愈伤组织的诱导效果。[方法]通过配制不同的培养基，选择适宜诱导断血流愈伤组织的培养基;然后选用适宜的培养基，研究不同浓度的6-BA及NAA对断血流愈伤组织诱导的影响。[结果]MS、N6、B5、RM、Miller 5种基本培养基中，适合断血流愈伤组织诱导的基本培养基为MS;研究不同的生长素NAA及细胞分裂素6-BA浓度时发现，NAA为0.1 mg/L和6-BA为1.0 mg/L时，断血流组培效果较好。[结论]断血流组培效果最好的培养基是MS培养基中NAA为0.1 mg/L和6-BA为1.0 mg/L。
　　关键词断血流;培养基;植物生长调节剂;诱导;愈伤组织
　　中图分类号 S567 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2014）33-11667-02
　　Research on the Condition of Calls Induction of Genuine Clinopodii polycephali of Anhui
　　CHEN Yu1， WANG Fang1， LI Yao-ting2*
　　（1. Xishan Biotechnology Company Ltd of Lu’an， Lu’an， Anhui 237005; 2.Plant Cell Engineering of West Anhui University Engineering Research Center of Anhui， Lu’an， Anhui 237012）
　　Abstract [Objective] The research aimed to study the effect of the media types and the concentration of plant growth regulator on the callus induction of Clinopodii polycephali. [Method] Choose the suitable culture medium from the preparation of different kinds of medium. In the appropriate culture medium cases， the effect of the different concentration of 6-BA and NAA on inducing callus of Clinopodii polycephali were studied.[Result]MS was best to induce callus of Clinopodii polycephali among MS， N6， B5， RM， Miller.The research of the different concentrations of auxin NAA and cytokinin 6-BA found that when NAA was 0.1 mg/L and 6-BA was 1.0 mg/L， the effect on inducing callus of Clinopodii polycephali was better. [Conclusion]The best suitable medium was MS with NAA 0.1 mg/L and 6-BA 1.0 mg/L.
　　Key words Clinopodii polycephali;Medium; Plant growth regulator; Induction; Callus
　　基金项目安徽省科技攻关计划项目（12010402083）。
　　作者简介陈宇（1988- ），女，山东枣庄人，硕士，从事中药材病虫害防治研究。*通讯作者，工程师，博士，从事中药材组培及栽培技术研究。
　　收稿日期 2014-10-15
　　断血流是1970年从安徽民间发掘出来的止血药，为皖西大别山道地中药，是唇形科植物风轮菜Clinopodium chinensis或荫风轮Clinopodium polycephalum的干燥地上部分;风轮菜载于1406年的《救荒本草》，荫风轮载于1848年的《植物明实图考》。风轮菜分布于浙江、江西、福建、广东、广西、贵州等地;荫风轮主要分布于江苏、安徽、广西、贵州、云南、四川等地。皖西大别山断血流年产量300 t左右，药材微苦、味涩、辛凉，其功能为凉血止血。2005版药典一部收载的断血流即为上述2种原植物。临床上应用于吐血、咯血、尿血、崩漏、外伤出血等[1-4]，用处较广，市场潜力良好。笔者通过试验研究不同的基础培养基以及添加的植物生长调节剂浓度对断血流愈伤组织的诱导效果，为进一步的诱导育种和断血流皂苷A的工业化生物合成奠定基础。
　　1 材料与方法
　　1.1 试验材料
　　六安霍山采集的断血流。
　　1.2 培养条件
　　在无菌室内进行培养，培养温度控制在（25±2）℃，光照强度 1 800～2 000 lx，每天光照 12 h。
　　1.3 试验方法
　　1.3.1 不同基本培养基对断血流愈伤组织诱导的影响。
　　1.3.1.1 培养基的配制。
　　以MS、N6、B5、RM、Miller为基本的培养基，附加蔗糖30 g/L、琼脂4 g/L、细胞分裂素6-BA（1.0 mg/L）和生长素NAA（0.1 mg/L）。将做好的培养基搅拌均匀，并用氢氧化钠将pH调整至5.8～6.0。
　　1.3.1.2 培养基的灭菌。将配制好的培养基分装到组培瓶中，用盖子封好，分装，封口、标明培养基种类和日期，放入高压灭菌锅灭菌。