烤烟烟叶胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶分离条件的优化

　　摘要：通过不同流动相、测定温度、流速的对比，优化了分离烟叶总DNA中胞嘧啶和5－甲基胞嘧啶的高效液相色谱法。烤烟烟叶DNA采用CTAB法提取，高氯酸水解，用KOH调节pH到3－5，取上清液测定。色谱柱为Nucleosil C₁₈(250mm×4.6mm，5μm)。优化后测定条件为：流动相采用甲醇：5mmol／L戊烷磺酸钠(10:90，V／V)，流速0.7ml／min，柱温30℃，检测波长273nm，进样量20μl。该方法简化了流动相的配制，缩短了分离时间，胞嘧啶和5－甲基胞嘧啶的加标回收率分别为103.50％和96.67％，相对标准偏差为2.35％和2.80％。用该方法研究烤烟烟叶发育过程中总DNA胞嘧啶和5－甲基胞嘧啶的含量，效果良好，符合烟叶生长发育规律。
　　关键词：反相高效液相色谱；烤烟烟叶；5－甲基胞嘧啶；胞嘧啶
　　中图分类号：S572－34　文献标识号：A　文章编号：1001－4942(2010)06－0094－04