3种中药材对番茄根围土壤线虫影响及对根结线虫的毒力
摘要：研究３种中药材天南星、半夏和商陆对番茄根际根结线虫数量、土壤线虫群落组成的影响，并测定这３种中药材对根结线虫２龄幼虫杀线虫活性。盆栽试验表明，在施入中药材的土壤中，植物寄生性线虫的个体数量明显减少，非植物寄生性线虫的数量明显增加，土壤线虫群落结构更利于植物生长。对３种中药材的甲醇－乙醇提取物的生物学测定结果表明，３种中药材提取物对根结线虫均有一定毒杀作用。天南星、商陆和半夏２４ ｈ的ＥＣ５０分别为０．４７、１．９８、３．９１ ｇ／Ｌ，４８ ｈ的ＥＣ５０分别为０．２４、０．５２和２．５０ ｇ／Ｌ。３种中药材中，天南星可作为一种有潜力的植物源杀线虫剂资源加以利用。
关键词：中药材；番茄根围；根结线虫；土壤线虫；毒力
中图分类号：Ｓ１５４．３８＋６；Ｓ４３６．４１２．２＋９ 文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０11）14－2870-03
Effects of Three Kinds of Chinese Herbal Medicine on Soil Nematode of Tomato Rhizosphere Soil and Its Toxicity to the Root-knot Nematode
ＷＡＮＧ Ｒｏｎｇ，ＳＨＩ Ｌｉ－ｂｏ，ＷＵ Ｈａｉ－ｙａｎ
（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ， Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｔａｉ’ａｎ ２７１０１８， Ｓｈａｎｄｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｐｏｔ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｔｈｒｅｅ ｋｉｎｄｓ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｈｅｒｂａｌ ｍｅｄｉｃｉｎｅ， Ａｒｉｓａｅｍａ ｅｒｕｂｃｓｃｅｎｓ （ＴＮＸ）， Ｐｉｎｅｌｌｉａ ｔｅｒｎａｔａ （ＢＸ）， Ｐｈｙｔｏｌａｃｃａ ａｃｉｎｏｓａ Ｒｏｘｂ （ＳＬ） ｏｎ ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｔｏｍａｔｏ ｒｏｏｔ－ｋｎｏｔ ｎｅｍａｔｏｄｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｓｏｉｌ ｎｅｍａｔｏｄｅ ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ． Ｍｅａｎｗｈｉｌｅ， ｔｈｅ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｈｅｒｂａｌ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｏｎ the second instar larvae of ｒｏｏｔ-ｋｎｏｔ ｎｅｍａｔｏｄｅ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｐｌａｎｔ ｐａｒａｓｉｔｉｃ ｎｅｍａｔｏｄｅ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｂｕｔ ｎｏｎ－ｐｌａｎｔ ｐａｒａｓｉｔｉｃ ｎｅｍａｔｏｄｅ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｄｒａｍａｔｉｃａｌｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ａｆｔｅｒ ｔｈｅ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｈｅｒｂａｌ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｐｏｗｄｅｒ， ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｓｏｉｌ ｎｅｍａｔｏｄｅ ｗａｓ ｍｏｒｅ ｂｅｎｅｆｉｃｉａｌ ｔｏ ｐｌａｎｔ ｇｒｏｗｔｈ． Ｂｙ ｔｈｅ ｂｉｏａｓｓａｙ ｏｆ ｃａｒｂｉｎｏｌ－ｅｔｈａｎｏｌ ｅｘｔｒａｃｔion ｆｒｏｍ ｔｈｅ ３ ｋｉｎｄｓ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｈｅｒｂａｌ ｍｅｄｉｃｉｎｅ， ｉｔ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅｙ ａｌｌ ｈａｄ ｆａｔａｌ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｎ ｒｏｏｔ-ｋｎｏｔ ｎｅｍａｔｏｄｅ． ＥＣ５０ ｏｆ ＴＮＸ， ＳＬ ａｎｄ ＢＸ ｗａｓ ０．４７， １．９８， ３．９１ ｇ／Ｌ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ ｉｎ ２４ ｈ． ＥＣ５０ ｏｆ ＴＮＸ， ＳＬ ａｎｄ ＢＸ ｗａｓ ０．２４， ０．５２和２．５0 ｇ／Ｌ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ ｉｎ ４８ ｈ． ＴＮＸ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｔｒｅａｔｅｄ ａｓ ａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｐｌａｎｔ ｓｏｕｒｃｅ ｆｏｒ ｂｉｏ－ｎｅｍａｔｉｃｉｄｅ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｃｈｉｎｅｓｅ ｈｅｒｂａｌ ｍｅｄｉｃｉｎｅ； tomato rihizosphere soil； ｒｏｏｔ－ｋｎｏｔ ｎｅｍａｔｏｄｅ； ｓｏｉｌ ｎｅｍａｔｏｄｅ； ｔｏｘｉｃｉｔｙ
近年来，随着保护地蔬菜种植面积的扩大，受保护地密闭、高温、高湿和复种指数增加等因素影响，蔬菜根结线虫病发生呈逐年加重趋势，在黑龙江、山东、辽宁、北京、河南、湖北、江苏、云南和海南等地都有根结线虫病严重发生和流行的报道，一般可造成作物减产１０％～２０％，严重可达３０％～４０％，甚至绝产［１］。番茄根结线虫病已上升为番茄生产上的重要病害，但目前国内尚无大面积推广应用的抗根结线虫病的番茄品种，防治主要依靠化学杀虫和栽培措施，由于环境安全和食品安全问题，杀线虫剂的使用受到诸多限制，番茄根结线虫病的防治缺乏有效措施，需要开发无公害的杀线虫剂用以防治番茄根结线虫，其中植物源农药是较好的选择。在研发植物源杀线虫剂时，除研究杀线虫功效外，还研究其对土壤中线虫群落结构的影响，可为研制开发新型植物源杀线虫剂提供依据。
１材料与方法
１．１试验材料
番茄品种为毛粉８０２，３种中药材为天南星（ＴＮＸ）、半夏（ＢＸ）和商陆（ＳＬ）。取染根结线虫病的番茄根在组织捣碎机中捣碎，过３２５目、５００目筛收集根结线虫虫卵，体视显微镜下计数，制备１ ０００个／ｍＬ的线虫卵悬液。
１．２盆栽试验
盆直径为１１ ｃｍ、高９ ｃｍ，每盆土样１００ ｇ，供试土壤取自菜园０～４０ ｃｍ土层，均匀混合，营养状况见表１。每盆用中药材粉２ ｇ，与土壤充分混匀。每盆移入２～４叶期番茄苗１株，将线虫卵悬液浇于番茄根部。试验共５个处理：天南星＋线虫卵５ ０００个（ＴＮＸ）、半夏＋线虫卵５ ０００个（ＢＸ）、商陆＋线虫卵
５ ０００个（ＳＬ）、对照１无中药材仅线虫卵５ ０００个（ＣＫ＋Ｎ）、对照２不接种线虫不用中药材（ＣＫ），每处理２０盆。３个重复。接种后１５、３０、４５、６０ ｄ取土样，采用烘干法测定土壤含水量［２］，折算干土质量。同时采用淘洗过筛重糖离心法收集土壤线虫，６０ ℃水浴杀死，用ＴＡＦ固定液固定［３］。在Ｏｌｙｍｐｕｓ光学显微镜和Ｍｏｔｉｃ体视解剖镜下进行土壤线虫的计数和鉴别，土壤中线虫数折算为１００ ｇ干土中所含线虫数。接种后１５ ｄ和４５ ｄ进行土壤样品中线虫的鉴别。接种后３０、４５、６０ ｄ测定番茄植株的地上和地下部分的鲜重和干重。
１．３中药材杀虫活性检测
１．３．１供试线虫清水洗净感染南方根结线虫的番茄植株根，解剖镜下挑取卵囊，卵囊用０．２％次氯酸钠溶液消毒３ ｍｉｎ，无菌水冲洗５次，无菌水中孵化，２龄幼虫用于毒力测定。
１．３．２中药材提取液称取各种中药材１０ ｇ溶于１００ ｍＬ甲醇∶乙醇体积比１∶１的混合液中，２６ ℃浸泡４８ ｈ后抽滤，滤液用旋转蒸发仪蒸发甲醇和乙醇获提取物，用无菌水稀释成０．０５、０．５、５ ｇ／Ｌ提取液，置于４ ℃冰箱备用。
１．３．３毒杀试验配制每１５０ μＬ含３０条南方根结线虫的线虫悬浮液。在酶联板加样孔中每孔加１５０ μＬ线虫悬浮液后加１５０ μＬ的各浓度提取物稀释液，以清水为对照，每处理２个重复，检查２４ ｈ和４８ ｈ后的存活情况，记录死亡线虫条数。线虫死亡率＝死亡线虫数／供试线虫数×１００％，线虫校正死亡率＝（处理线虫死亡率－对照线虫死亡率）／（１－对照线虫死亡率）×１００％。