不同产地桑叶药材UPLC指纹图谱研究
[摘要] 目的 建立不同产地桑叶UPLC指纹图谱。 方法 采用ACQUITY UPLC BEH C18（2.1 mm×50.0 mm，1.7 μm）色谱柱，流动相为甲醇-0.2%磷酸水溶液，梯度洗脱，检测波长为358 nm，流速为0.6 ml/min，柱温40℃，进样体积1 μl。 结果 建立了桑叶专属性的UPLC指纹图谱，确定了15个共有峰，不同产地桑叶样品具有较好的相似度。结论 UPLC指纹图谱方法重复性好，简便可靠，可用于桑叶的快速鉴别，可以为桑叶的质量控制和市场应用提供依据。
[关键词] 桑叶；指纹图谱；超高效液相色谱法
[中图分类号] R286[文献标识码] A[文章编号] 1674-4721（2014）05（b）-0008-04
Study on UPLC fingerprint of Morus alba L. from different regions
PENG Li-ying PENG You-ling YANG Xian-guo▲
Hunan Traditional Chinese Medical College,Zhuzhou412012,China
[Abstract] Objective To establish UPLC fingerprint of Morus alba L. from different regions. Methods Column ACQUITY UPLC BEH C18(2.1 mm×50.0 mm,1.7 μm)was used.The mobile phase was methanol-0.2％ phosphoric acid water with gradient elution.The detection wave-lengths was 358 nm and column temperature was 40℃ with the flow rate of 0.6 ml/min.The sample injection was 1 μl. Results A specificity fingerprint chromatogram was produced and 15 characteristic peaks were designated.The results showed that the collected samples had a good similarity. Conclusion UPLC fingerprint is a reliable,available and quick method of quality control of Morus alba L. and it is necessary for the safe and practicable use of the medicine.
[Key words] Morus alba L.;Fingerprint;UPLC
桑叶为桑科植物桑（Morus alba L.）的叶，初露后采收，除去杂质，晒干，具有疏散风热、清肺润燥、清肝明目的功效，主要用于风热感冒、肺热燥咳、头晕头痛、目赤昏花[1]。桑叶药食两用，现代研究表明桑叶具有降血糖[2-4]、降血压[5]、降血脂、抗炎、抗衰老[6]、抗肿瘤[7]等功效，在药用和食品保健方面都发挥了重要作用。目前，桑叶的质量控制主要集中于芦丁和绿原酸含量的测定[8-12]，除芦丁外，其他黄酮类化合物也是桑叶质量控制的热点[13-16]。随着国内外市场对桑叶的需求愈来愈大，桑叶的质量也参差不齐。课题组认为中药是多成分、多环节、多靶点的药物，质量控制也需要体现中药特色，仅靠单一或几个指标难以衡量质量的优劣。中药指纹图谱是一种综合的、可量化的鉴定手段，是建立在中药化学成分系统研究的基础上，主要用于评价中药材及中药制剂半成品质量的真实性、优良性和稳定性，符合中医中药整体性和模糊性的特点[17]。课题组为了进一步控制桑叶质量，采用UPLC方法，对从全国收集的桑叶药材进行指纹图谱进行研究。
1 仪器与试剂
1.1 仪器
KQ-100B型超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司）；JA51002型电子分析天平（岛津）；Waters Acquity UPLC H-Class超高效液相色谱系统，Empower工作站，含四元梯度泵、自动进样器、紫外检测器（Waters公司）。
1.2 试剂
甲醇（色谱纯，TEDIA公司），乙腈（色谱纯，TEDIA公司），水为娃哈哈纯净水，磷酸（色谱纯，北京化工厂）。
1.3 对照品及药材
对照品异槲皮苷和紫云英苷，购于成都植标化纯生物技术有限公司，供含量测定用，批号分别为PCS0371-lot 120510和PCS0468-lot 120328；对照品芦丁购于中国食品药品检定研究院，批号为0080-9705。不同产地的桑叶药材11批，均由湖南中医药大学生药学教研室潘清平教授鉴定为桑科植物桑（Morus alba L.）的叶，药材批号及来源见表1。
表1 桑叶药材批号及来源
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18（2.1 mm×50.0 mm，1.7 μm）；流速：0.6 ml/min；检测波长：358 nm；柱温：40℃；进样体积：1 μl；流动相：甲醇（A）-0.2%磷酸水（B）梯度洗脱，洗脱程序：0→22 min，10%A→32%A。
2.2 供试品溶液的制备
药材粉碎，过60目筛，取药粉约0.5 g，精密称定，置于100 ml三角瓶中，加入75%甲醇50 ml，超声处理（功率250 W，频率33 kHz）30 min，放冷，用75%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。
2.3 对照品溶液的制备
精密称取对照品异槲皮苷、芦丁和紫云英苷适量，用75%甲醇溶解，定容，得到其浓度分别为0.092、0.042、0.054 μg/μl。
2.4 方法学考察
2.4.1 精密度试验取同一批桑叶供试品（20080305），按照2.2项的方法制备供试品溶液1份，按照上述色谱条件，连续进样6次，测定指纹图谱。以10号峰（图1）的保留时间和峰面积为参照，计算样品中所含15个共有峰的相对保留时间和相对峰面积。各共有峰的相对保留时间的RSD＜0.5％，相对峰面积的RSD＜1.0％，表明仪器的精密度良好。
图1 桑叶药材共有模式指纹图谱
2.4.2 重复性试验按上述方法平行制备同一批桑叶供试品（20080305），测定指纹图谱。考察样品中所含有15个共有峰的相对保留时间和相对峰面积，各色谱峰的相对保留时间的RSD＜0.5%，相对峰面积的RSD＜1.0％，提示方法的重复性良好。
2.4.3 稳定性试验同一批桑叶供试品（20080305）溶液，分别于0、2、4、6、8、12、24 h进样测定，以各峰的相对保留时间和相对峰面积进行考察，桑叶样品24 h各色谱峰的相对保留时间的RSD＜0.5％，相对峰面积的RSD＜1.0％，表明桑叶样品溶液在24 h内稳定性良好。