改进RP—HPLC法测定牛黄及安宫牛黄丸中的游离胆红素以保证牛黄类药材及安宫牛黄丸的质量与用药安全
【摘要】 目的 探究改进RP-HPLC法测定牛黄及安宫牛黄丸中的游离胆红素以保证牛黄类药材及安宫牛黄丸的质量与用药安全。方法 样品用二氯甲烷提取， 用HPLC法测定游离胆红素的含量。考察牛黄及安宫牛黄丸中不同分散介质如碳酸钙和硅藻土对游离胆红素测定的影响。色谱条件， C18色谱柱， 检测波长分别为Kromasil 100， （5 μm， 0.46 cm×15 cm）， 450 nm。以乙腈-1%冰醋酸（95：5）为流动相。结果 胆红素在0.3055～30.55 μg/ml范围内线性良好， 加样回收率最高。结论 对于牛黄及安宫牛黄丸， 采用碳酸钙作为分散介质的测定结果优于硅藻土等介质。值得临床推广使用。
【关键词】 RP-HPLC法；安宫牛黄丸；游离胆红素；碳酸钙；介质
脊索动物门哺乳纲牛科动物牛干燥的胆结石， 牛黄完整者多呈卵形， 质轻， 表面金黄至黄褐色， 细腻而有光泽[1]。中医学认为牛黄气清香， 味微苦而后甜， 性凉。可用于解热、解毒、定惊。内服治高热神志昏迷、小儿惊风、抽搐等症， 外用治、口疮痈肿、疗毒症。由于天然牛黄很珍贵， 国际上的价格要高于黄金， 现在大部分使用的是人工牛黄[2]。人工牛黄中游离胆红素含量如果偏高则会引起神经毒性反应， 危机生命。因此， 检测牛黄及安宫牛黄丸中游离胆红素的含量对药品的质量至关重要。
1 资料与方法
1. 1 一般资料 选取安宫牛黄丸作为检测材料， 该药品具有清热解毒、镇惊开窍等功效。可用于热病、邪入心包、高热惊厥， 神志谵语；中风昏迷及脑炎、脑膜炎、中毒性脑病， 脑出血、败血症见上述证候者。该药的化学成分有牛黄、水牛角浓缩粉、麝香、珍珠、朱砂、雄黄、黄连、黄芩、栀子、郁金、冰片。
1. 2 方法 采用RP-HPLC法测定安宫牛黄丸。样品用二氯甲烷提取， 用HPLC法测定游离胆红素的含量。考察牛黄及安宫牛黄丸中不同分散介质如碳酸钙和硅藻土对游离胆红素测定的影响。色谱条件， C18色谱柱， 检测波长分别为Kromasil 100， （5 μm， 0.46 cm×15 cm）， 450 nm。以乙腈-1%冰醋酸（95：5）为流动相。
1. 3 统计学方法 采用SPSS17.0统计学软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验；计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。
2 结果
游离胆红素在0.3055～30.55 μg/ml范围内线性良好， 加样回收率在95%～100%。对于安宫牛黄丸， 采用碳酸钙作为分散介质的测定结果优于硅藻土等介质。采用碳酸钙替代硅藻土作为牛黄类药材及安宫牛黄丸样品中游离胆红素分析的分散介质， RP-HPLC方法准确度高， 操作简便易行。
3 讨论
牛黄又叫西黄， 是脊椎动物牛科牛的胆囊结石。干燥的牛黄呈卵圆形或椭圆形， 或其他不规则形状， 外表淡黄褐色， 或金黄色， 平滑光泽， 质轻而脆， 容易破碎， 在碎断面可以看出它是由薄层重迭积累而形成的。性味苦、甘、凉， 入心肝经。解毒化碳定惊。具有清热、解毒、镇惊等功效， 适用于急性热病的高热、手足抽搐痉挛、昏迷不醒等症；又可用于热疖、疔疮、咽喉肿痛、口疮等症。目前， 市场上多采用人工牛黄， 而人工牛黄由牛胆粉、胆酸、猪去氧胆酸、牛磺酸、胆红素、胆固醇、微量元素等加工制成[3]。人工牛黄中游离胆红素若过高会引起神经毒作用。游离胆红素是指血液中红细胞的降解产物血红素没有在肝脏与葡糖醛酸结合生成葡糖醛酸胆红素。正常情况下游离胆红素浓度极低， 少于1%。当游离胆红素超过一定浓度时它可以通过血脑屏障进入中枢神经细胞引起核黄疸。核黄疸在婴幼儿则表现为嗜睡、拒奶、反应差、呻吟、尖叫， 病情进一步加重者凝视， 头向后仰、角弓反张、抽搐、呼吸不规则， 出现病理性呼吸[4]。因此， 测定药品中游离胆红素的含量十分重要， 本实验采用的RP-HPLC法简单易行， 准确性高[5]。用HPLC法测定游离胆红素的含量。同时考察牛黄及安宫牛黄丸中不同分散介质如碳酸钙和硅藻土对游离胆红素测定的影响。色谱条件为Kromasil 100-C18色谱柱（5 μm， 0.46 cm×15 cm）， 以乙腈-1%冰醋酸（95：5）为流动相， 检测波长为450 nm。结果胆红素在0.3055～30.55 μg/ml范围内线性良好， 加样回收率在95%～105%。结果表明对于牛黄及安宫牛黄丸， 采用碳酸钙作为分散介质的测定结果优于硅藻土等介质。值得临床推广使用。
参考文献
[1]王春来.牛黄及其代用品概述.实用中医药杂志， 2010， 26（10）： 732.
[2]国家药典委员会.中华人民兵和国药典（一部）. 2010版.北京：中国医药科技出版社， 2010：66， 162.
[3]杨展澜， 孙颖， 田文， 等.红外光滑法研究胆红索在溶液中的结构.光谱学于光谱分析， 2000， 20（5）：635-637.
[4] 李爱玲， 赵建英， 寿文虹. 现行药品标准中亟待规范的一些问题. 中国药业. 2010（10）：6.
[5] 倪晓霓. 我国药品标准管理中存在的问题及建议. 齐鲁药事， 2010， 29（7）：387-388.
[收稿日期：2014-07-18]