超高效液相色谱—电喷雾串联质谱法检测茶叶中洛伐他汀的含量

　　摘要：采用超高效液相色谱-电喷雾串联四级杆质谱仪（UPLC-ESI-MS/MS），于多反应监测（MRM）模式下建立了茶叶中洛伐他汀的定性定量分析方法。样品经甲醇超声提取，Waters Acquity UPLC？誖BEH C18（1.7 μm，2.1 mm×50 mm）柱分离，超高效液相色谱-串联质谱法测定。在0.000 8～0.200 0 μg/mL间有良好的线性关系（R2>0.999 0），检出限为0.000 2 μg/mL；在3个添加浓度水平下，平均加标回收率为98.54%～ 109.86%；相对标准偏差（RSD，n=6）为1.45%～3.09%。该方法准确、可靠、灵敏度高，适用于茶叶中洛伐他汀含量的检测。
　　关键词：茶；超高效液相色谱-电喷雾串联质谱；洛伐他汀；多反应监测
　　中图分类号：O657.63 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2015）11-2732-03
　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.11.045
　　Determination of Lovastatin in Tea Using Ultra Performance Liquid Chromatography-Electrospray Tandem Mass Spectrometry
　　WU Xiao-gang， LIU Bin-qiu， CHEN Xiao-quan， ZHANG Wei， HU Cheng-yun， LING Deng-meng
　　（Technology Center Laboratory of Menghai Tea Industry Co.， Ltd， TAETEA Group， Menghai 666200， Yunnan， China）
　　Abstract： An UPLC-ESI-MS/MS method with multiple reaction monitoring （MRM） mode was developed for the qualitative and quantitative analysis of lovastatin in tea. The sample preparation was based on ultrasonic-assisted extraction，Waters Acquity UPLC？誖BEH C18（1.7 μm，2.1 mm×50 mm） column separation and UPLC-MS/MS determination. The method showed a good linearity （R2>0.999 0） in the 0.000 8～0.200 0 μg/mL and LOD of 0.000 2 μg/mL. For three spiked levels，the average recoveries were from 98.54% to 109.86%， and the relative standard deviations （RSD，n=6） were from 1.45% to 3.09%. The method was reliable， accurate， sensitive and appropriate for the determination of lovastatin in tea.
　　Key words： tea； UPLC-ESI-MS/MS； lovastatin； multiple reaction monitoring （MRM）
　　1979年， Endo等[1]从Monascus ruber的培养液中分离出抑制HMG-CoA（3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A）还原酶活性的Monacolin K，同时 Alberts等[2]于1980 年也从Aspergillus terreus中分离出与Monacolin K相同的物质Mevinolin，后命名为洛伐他汀（Lovastatin），由Merk公司率先制成药品上市。洛伐他汀是人体胆固醇合成中的关键酶HMG-CoA还原酶的抑制剂，因其疗效好、副作用低，目前已被广泛地应用于临床高血脂症等疾病的治疗。
　　普洱茶是以云南大叶茶[Camellia sinensis （Linn.） var. assamica （Masters） Kitamura]的晒青毛茶为原料，在微生物的作用下，经漫长的自然陈化或快速人工渥堆后发酵而成。目前，能产洛伐他汀的微生物已见报道[3]，如曲霉菌（Aspergillus）、红曲霉菌（Monascus）、毛霉菌（Mucor）和青霉菌（Penicillium）等。Hwang等[4]首先在普洱茶中发现有洛伐他汀的存在；随后，Yang等[5]研究指出洛伐他汀是在普洱茶中发现的惟一的他汀类化合物，在乙酸乙酯提取物中含量较高，且全部以内酯环结构存在，而在100 ℃普洱茶水提取物中含量较低，以内酯环结构和羟酸结构两种形式存在；谢春生等[6]在普洱熟茶中也检测出了洛伐他汀，洛伐他汀含量与普洱茶发酵程度成正比，其提取工艺和产品（制剂）也申请了国家发明专利。
　　国内对洛伐他汀的测定始于20世纪90年代，最常见也是最典型的方法是高效液相色谱法，此外还有薄层扫描法和紫外分光光度法等。薄层层析法受试验条件干扰较大，方法的回收率较低；用紫外分光光度法对待测物检测专属性不强，准确度也不高；高效液相色谱法检测时间较长，检测效率低下。茶叶基质的复杂性增加了洛伐他汀含量检测的难度，近年来发展起来的超高效液相色谱-质谱联用（UPLC-MS）技术具有检测灵敏度高、适用范围广、分析速度快以及可有效排除复杂基质干扰等优点，因而成为首选的检测手段。但目前国内尚未见利用超高效液相色谱-电喷雾串联质谱（UPLC-ESI-MS/MS）检测茶叶中洛伐他汀含量的文献报道。因此，本工作通过对茶叶中洛伐他汀物质的提取、净化及色谱-质谱检测条件进行研究，建立了UPLC-ESI-MS/MS测定茶叶中洛伐他汀含量的方法。