[摘要] 对不同品种威灵仙药材进行质量调查。优化《中国药典》2010年版威灵仙含量测定项下方法，并测定威灵仙样品中常春藤皂苷元和齐墩果酸的含量。所测30批样品中仅有3批威灵仙Clematis chinensis药材中常春藤皂苷元和齐墩果酸的含量符合《中国药典》2010年版规定的标准；东北铁线莲C. manshurica药材中齐墩果酸质量分数大于0.30%，但常春藤皂苷元含量极微；棉团铁线莲C. hexapetala中未检测到常春藤皂苷元和齐墩果酸。
[关键词] 威灵仙；常春藤皂苷元；齐墩果酸；含量测定
[稿件编号] 20121217007
[基金项目] 国家科技基础性项目（SB2007FY020）
[通信作者] *马长华，Tel：（010）84738603，E-mail：machanghua60@sina.com
[作者简介] 李倩倩，硕士研究生，Tel：15201391428
中药威灵仙来源于毛茛科植物威灵仙Clematis chinensis Osbeck、棉团铁线莲C. hexapetala Pall.或东北铁线莲C.manshurica Rup. r的干燥根及根茎，具有祛风湿、通经络之功效，用于风湿痹痛、肢体麻木、筋脉拘挛、屈伸不利[1]。《中国药典》2010年版新增以常春藤皂苷元及齐墩果酸为指标进行的质量控制，研究对以上3个品种威灵仙药材进行质量调查 ，优化《中国药典》2010年版威灵仙含量测定项下方法，并对30 批威灵仙药材中常春藤皂苷元和齐墩果酸的含量进行测定，结果表明仅有来源于毛茛科植物威灵仙C. chinensis的部分药材符合《中国药典》2010年版威灵仙含量测定的标准。
1 材料
Waters 1525 高效液相色谱仪（Waters2707自动进样器，柱温箱，Waters2998二极管阵列检测器，Waters1525泵，breezeTM 2色谱工作站）；Metteler-AE240型1/10万电子天平；Sartorius BS110S 1/1万电子天平。齐墩果酸（批号 110709-200304，购于中国食品药品检定研究院），常春藤皂苷元（纯度≥98%，HPLC，购于北京寰宇科创生物科技发展有限公司）。乙腈（Fisher）为色谱纯，流动相用水为娃哈哈纯净水，其余试剂均为分析纯。威灵仙药材来自国家科技基础性项目（SB2007FY020）《珍稀濒危和常用大宗药用植物资源调查》项目组在全国范围内收集，并由北京中医药大学刘春生教授鉴定，No.1～10为威灵仙C. chinensis，No.11-15为棉团铁线莲C. hexapetala ，No.16～30为东北铁线莲C. manshurica。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 Agela C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B）；梯度洗脱，0～15 min（75%A），15～20 min（75%～90%A），20～30 min（90%A），30～35 min（90%～75%A），35～45 min（75%A）；流速1 mL·min-1；检测波长 205 nm；进样量 10 μL。在该条件下分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10 μL，色谱图见图1。
A.对照品溶液；B.威灵仙供试品溶液；C.棉团铁线莲供试品溶液；D.东北铁线莲供试品溶液；1.常春藤皂苷元 ；2.齐墩果酸。
图1 对照品溶液及不同品种样品的HPLC图
Fig.1 HPLC chromatograms of composite standard substance and samples
2.2 对照品溶液的制备 分别称取常春藤皂苷元对照品2.56 mg，齐墩果酸对照品8.22 mg，置于10 mL量瓶中，甲醇超声溶解，定容后分别得质量浓度为0.256 g·L-1的常春藤皂苷元对照品溶液和0.822 g·L-1的齐墩果酸对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备 取威灵仙粉末（过4号筛）约4 g，精密称定，按照《中国药典》2010年版“威灵仙[含量测定] ”项下[1]供试品溶液制备方法处理，即得。
2.4 方法学考察
2.4.1 线性关系考察 分别精密吸取对照品溶液1，5，10，20，30，40，50 μL，注入液相色谱仪，在2.1 项色谱条件下进行分析，记录色谱峰面积。结果以峰面积（Y）对对照品的进样质量（X）进行线性回归，得回归方程分别为常春藤皂苷元Y=8.21×105X-1.38×105， r=0.999 8， 0.256～12.8μg；齐墩果酸Y=7.10×105X-3.20×105，r=0.999 8， 0.822～41.1 μg。
2.4.2 精密度试验 精密吸取供试品溶液10 μL，连续进样6次，记录色谱峰面积，结果常春藤皂苷元和齐墩果酸峰面积的RSD分别为1.2%，0.98%。
2.4.3 重复性试验 精密称取同一批样品6份，同2.3 项下方法平行制备，测定，结果常春藤皂苷元和齐墩果酸质量分数（分别为0.13%，1.26%）的RSD分别为0.66%，1.8%，表明方法的重复性良好。
2.4.4 稳定性试验 取供试品溶液分别于0，2，4，6，8，12 h分别进样10 μL，依次测定峰面积，常春藤皂苷元和齐墩果酸的RSD分别为0.87%， 1.1%，表明该供试品溶液在12 h内稳定性良好。
2.4.5 加样回收率试验 取6份已知含量的样品约2 g，精密称定，同2.3 项下方法处理，并在用2 mol·L-1盐酸水解总皂苷以制得皂苷元的步骤加入常春藤皂苷元与齐墩果酸，因常春藤皂苷元与齐墩果酸不溶于盐酸溶液，故在溶解有总皂苷残渣的盐酸溶液中分别精密加入质量浓度为0.400 3 g·L-1的常春藤皂苷元甲醇溶液3 mL和质量浓度为3.52 g·L-1的齐墩果酸甲醇溶液3 mL。测定，计算加样回收率。结果常春藤皂苷元和齐墩果酸的平均回收率分别为96.4%， 96.5%， RSD分别为2.5%， 2.4%（n=6），结果见表1。