不同品种威灵仙药材的质量调查

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  [摘要] 对不同品种威灵仙药材进行质量调查。优化《中国药典》2010年版威灵仙含量测定项下方法,并测定威灵仙样品中常春藤皂苷元和齐墩果酸的含量。所测30批样品中仅有3批威灵仙Clematis chinensis药材中常春藤皂苷元和齐墩果酸的含量符合《中国药典》2010年版规定的标准;东北铁线莲C. manshurica药材中齐墩果酸质量分数大于0.30%,但常春藤皂苷元含量极微;棉团铁线莲C. hexapetala中未检测到常春藤皂苷元和齐墩果酸。
  [关键词] 威灵仙;常春藤皂苷元;齐墩果酸;含量测定
  [稿件编号] 20121217007
  [基金项目] 国家科技基础性项目(SB2007FY020)
  [通信作者] *马长华,Tel:(010)84738603,E-mail:machanghua60@sina.com
  [作者简介] 李倩倩,硕士研究生,Tel:15201391428
  中药威灵仙来源于毛茛科植物威灵仙Clematis chinensis Osbeck、棉团铁线莲C. hexapetala Pall.或东北铁线莲C.manshurica Rup. r的干燥根及根茎,具有祛风湿、通经络之功效,用于风湿痹痛、肢体麻木、筋脉拘挛、屈伸不利[1]。《中国药典》2010年版新增以常春藤皂苷元及齐墩果酸为指标进行的质量控制,研究对以上3个品种威灵仙药材进行质量调查 ,优化《中国药典》2010年版威灵仙含量测定项下方法,并对30 批威灵仙药材中常春藤皂苷元和齐墩果酸的含量进行测定,结果表明仅有来源于毛茛科植物威灵仙C. chinensis的部分药材符合《中国药典》2010年版威灵仙含量测定的标准。
  1 材料
  Waters 1525 高效液相色谱仪(Waters2707自动进样器,柱温箱,Waters2998二极管阵列检测器,Waters1525泵,breezeTM 2色谱工作站);Metteler-AE240型1/10万电子天平;Sartorius BS110S 1/1万电子天平。齐墩果酸(批号 110709-200304,购于中国食品药品检定研究院),常春藤皂苷元(纯度≥98%,HPLC,购于北京寰宇科创生物科技发展有限公司)。乙腈(Fisher)为色谱纯,流动相用水为娃哈哈纯净水,其余试剂均为分析纯。威灵仙药材来自国家科技基础性项目(SB2007FY020)《珍稀濒危和常用大宗药用植物资源调查》项目组在全国范围内收集,并由北京中医药大学刘春生教授鉴定,No.1~10为威灵仙C. chinensis,No.11-15为棉团铁线莲C. hexapetala ,No.16~30为东北铁线莲C. manshurica。
  2 方法与结果
  2.1 色谱条件 Agela C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相乙腈(A)-0.1%磷酸溶液(B);梯度洗脱,0~15 min(75%A),15~20 min(75%~90%A),20~30 min(90%A),30~35 min(90%~75%A),35~45 min(75%A);流速1 mL·min-1;检测波长 205 nm;进样量 10 μL。在该条件下分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10 μL,色谱图见图1。
  A.对照品溶液;B.威灵仙供试品溶液;C.棉团铁线莲供试品溶液;D.东北铁线莲供试品溶液;1.常春藤皂苷元 ;2.齐墩果酸。
  图1 对照品溶液及不同品种样品的HPLC图
  Fig.1 HPLC chromatograms of composite standard substance and samples
  2.2 对照品溶液的制备 分别称取常春藤皂苷元对照品2.56 mg,齐墩果酸对照品8.22 mg,置于10 mL量瓶中,甲醇超声溶解,定容后分别得质量浓度为0.256 g·L-1的常春藤皂苷元对照品溶液和0.822 g·L-1的齐墩果酸对照品溶液。
  2.3 供试品溶液的制备 取威灵仙粉末(过4号筛)约4 g,精密称定,按照《中国药典》2010年版“威灵仙[含量测定] ”项下[1]供试品溶液制备方法处理,即得。
  2.4 方法学考察
  2.4.1 线性关系考察 分别精密吸取对照品溶液1,5,10,20,30,40,50 μL,注入液相色谱仪,在2.1 项色谱条件下进行分析,记录色谱峰面积。结果以峰面积(Y)对对照品的进样质量(X)进行线性回归,得回归方程分别为常春藤皂苷元Y=8.21×105X-1.38×105, r=0.999 8, 0.256~12.8μg;齐墩果酸Y=7.10×105X-3.20×105,r=0.999 8, 0.822~41.1 μg。
  2.4.2 精密度试验 精密吸取供试品溶液10 μL,连续进样6次,记录色谱峰面积,结果常春藤皂苷元和齐墩果酸峰面积的RSD分别为1.2%,0.98%。
  2.4.3 重复性试验 精密称取同一批样品6份,同2.3 项下方法平行制备,测定,结果常春藤皂苷元和齐墩果酸质量分数(分别为0.13%,1.26%)的RSD分别为0.66%,1.8%,表明方法的重复性良好。
  2.4.4 稳定性试验 取供试品溶液分别于0,2,4,6,8,12 h分别进样10 μL,依次测定峰面积,常春藤皂苷元和齐墩果酸的RSD分别为0.87%, 1.1%,表明该供试品溶液在12 h内稳定性良好。
  2.4.5 加样回收率试验 取6份已知含量的样品约2 g,精密称定,同2.3 项下方法处理,并在用2 mol·L-1盐酸水解总皂苷以制得皂苷元的步骤加入常春藤皂苷元与齐墩果酸,因常春藤皂苷元与齐墩果酸不溶于盐酸溶液,故在溶解有总皂苷残渣的盐酸溶液中分别精密加入质量浓度为0.400 3 g·L-1的常春藤皂苷元甲醇溶液3 mL和质量浓度为3.52 g·L-1的齐墩果酸甲醇溶液3 mL。测定,计算加样回收率。结果常春藤皂苷元和齐墩果酸的平均回收率分别为96.4%, 96.5%, RSD分别为2.5%, 2.4%(n=6),结果见表1。