儿科肺炎患儿支气管肺泡灌洗液肺炎支原体DNA结果分析
[摘要] 目的 探讨儿科肺炎患儿支气管肺泡灌洗液中肺炎支原体感染情况。方法 回顾分析该院2015年1月—2017年6月所有送检168例。利用PCR方法检测肺泡灌洗液样本肺炎支原体DNA，按不同年龄、性别统计分析阳性率，并分析有无差异。结果 168例肺泡灌洗液检测肺炎支原体总阳性率为25.6%，男性患儿阳性率为27.4%，女性患儿阳性率为23.3%，而且都是4～6岁年龄段阳性率最高，达到53.3%，小于1岁年龄段阳性率最低。结论 肺泡灌洗液检测肺炎支原体总阳性率无性别差异，各年龄段感染率有差异。
[关键词] 肺炎；肺泡灌洗液；肺炎支原体
[中图分类号] R5 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2018）01（c）-0033-03
[Abstract] Objective This paper tries to investigate the infection of mycoplasma pneumoniae and bronchoalveolar lavage fluid in children with pneumonia. Methods Retrospective analysis of this hospital from January 2015 to June 2017 of all 168 cases of submission was conducted. The Mycoplasma pneumoniae DNA in bronchoalveolar lavage fluid was detected by PCR， and the positive rates were analyzed by age and gender， and there was no difference between them. Results The total positive rate of Mycoplasma pneumoniae detected by bronchoalveolar lavage fluid was 25.5%， the masculine positive rate was 27.3%， the female positive rate was 23.2%， and the positive rate was highest between 4 to 6 years old， reaching 53.3%， less than 1 years old， the lowest positive rate. Conclusion The total positive rate of Mycoplasma pneumoniae was not detected by bronchoalveolar lavage fluid， there was no difference in gender， and the infection rates were different in different age groups.
[Key words] Pneumonia； BALF； Mycoplasma pneumoniae
兒童支气管肺炎作为常见的幼儿下呼吸道感染性疾病，主要是由病原体感染所致，无论是发病率还是死亡率都相对比较高，对于幼儿的生命安全和身体健康有着很大的威胁。调查数据显示，每年全球大概有100 万～200万的儿童是因为小儿肺炎致死[1-2]，其中肺炎支原体肺炎（Mycoplasma pneumoniae pneumonia，MPP）占儿童类肺炎中的比例在20%～40%，并且这一比例随着儿童年龄的增加而有上升的趋势[3-4]。从肺炎的诊治情况来看，目前临床诊断MPP感染通常仍然采用血清学方法，而这种诊断方法受到抗体出现的时相等多方面因素影响的概率比较大[5-6]，进而对支气管肺炎的诊治造成了一定的干扰。支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）是以纤维支气管镜嵌入到肺段或亚段支气管水平反复以无菌生理盐水灌洗回收的液体，对肺泡灌洗液对行肺炎支原体检测并分析分布作为研究肺部疾病病因发病机制是诊断评价疗效和判断预后的一项手段，其检测结果对促进患儿的治疗、用药、康复、减少并发症有极大的帮助。利用PCR方法直接检测肺炎支原体DNA，是现阶段最有效的检测方法，具有低成本、快速、准确的特点，该文即是对2015年1月—2017年6月间东莞市妇幼保健院168例送检的BALF进行进行肺炎支原体DNA检测，现对检测结果总结分析如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
回顾分析该院所有送检168例，BALF样本利用荧光PCR方法检测肺炎支原体DNA，BALF样本按患儿性别设男95例、女73例两组，按不同年龄阶段把受检患儿分为<1岁72例、1～3岁43例、4～6岁30例、≥7岁23例共4个年龄组。
1.2 样本采集
所有患儿均符合文献[7]《诸福棠实用儿科学》支气管镜检查的适应证，予电子支气管镜检查。采用Olympus公司生产的EVIS LUCERA CV-260 系列型电子支气管镜。纤维支气管镜检查，术前6 h禁食，予以静脉镇静加局部麻醉的方法，采用2%利多卡因咽喉部局麻，纤维支气管镜经鼻、咽喉、声门进入气道，观察支气管形态，37℃生理盐水灌洗至炎症严重的肺段，1.0 mL/kg 至少灌洗3次，随即负压吸引以获取BALF，标本置一次性无菌硅化收集器中。
1.3 检测方法
BALF检测：主要利荧光PCR方法，以MP保守基因片段设计特异引物及特异Taqman探针，采用ABI 7500 FAST荧光PCR仪，项目试剂来自广州达安基因科技有限公司，将BALF标本充分振荡摇匀，吸取液体转至1.5 mL离心管中，1 200 r/min离心5 min，弃上清液，取沉淀加入50 μL核酸提取液，混匀后2 000 r/min离心10 s，100℃干浴10 min，12 000 r/min离心10 min，2 μL上清液加入43 μL反应液中进行PCR扩增。设备操作严格按照说明书操作。